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          標題摘要內容
           circRNA服務

          circRNA服務?
          circRNA熒光素酶報告檢測
          來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2017-09-03 | 10651 次瀏覽 | 分享到:


          Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。

          本實驗適用于驗證circRNA sponge功能,當miRNAscircRNA吸附,理論上細胞內miRNA的總量不會產生變化,因此無法通過qRT-PCR檢測來判斷miRNA是否吸附。我公司利用psiCHECK2質粒,對miRNAscircRNA的關系作出準確判斷,其原理簡述如下:

          1)構建一個將circRNA特定片段插入到熒光素酶報告基因質粒psiCHECK2中;

          2)將要檢測的miRNA與報告基因質粒共轉染293細胞或其它相關的細胞系。如果此miRNA能夠與circRNA結合,則熒光素酶基因就會下調,熒光素酶的表達量與miRNA-circRNA的作用強度成反比;

          3) 如果將circRNA序列具有 sponge功能的片段進行突變,則質粒與miRNA共轉染到細胞中,熒光素酶的表達量將不再受miRNA的影響。


          技術優勢:


          (1)采用psiCHECK2質粒Luciferase雙熒光報告系統,可以獲得寬泛的線性定量范圍與極高的靈敏度;
          2)采用瞬時轉染技術,操作簡便、快速,周期短,適用于絕大多數細胞類型。


          實驗提供 
          1)克隆含有circRNA或結合位點序列的報告質粒;


          2詳細實驗結果報告與數據分析。



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